ในเรื่องราว “Night at the Museum: Secret of the Tomb”, พิพิธภัณฑ์ Natural History Museum ในนิวยอร์กต้องเผชิญกับปัญหาอันน่าประหลาดใจเมื่อสิ่งมีชีวิตที่จับต้องได้ในพิพิธภัณฑ์กลับมีชีวิตขึ้นในช่วงค่ำคืน. แลร์รี่, ผู้อำนวยการฝ่ายปฏิบัติการของพิพิธภัณฑ์, ต้องทำทุกอย่างเพื่อค้นหาว่าเกิดอะไรขึ้นและซ่อมแซมแผ่นจารึกที่ทำให้สิ่งมีชีวิตได้. เพื่อปกป้องครอบครัวและสิ่งมีชีวิตในพิพิธภัณฑ์, เขาต้องนำทางพานิค, ลูกชายของเขา, ไปยังพิพิธภัณฑ์อังกฤษ. ในการเดินทางนี้, พวกเขาจะพบปริศนาและความลับของแผ่นจารึกที่นั่น.